NY∕T 572-2016 兔病毒性出血病血凝和血凝抑制试验方法(农业)
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ID： |
5D0506ECE3AE4C889435654CA9680501 |
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文件大小(MB)： |
0.38 |
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6 |
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日期： |
2021-12-26 |
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ICS 11.220,B 41 NY,中华人民共和国农业行业标准,NY/ T 572-2016,代替NY/T 572-2002,兔病毒性出血病血凝和血凝抑制试验方法,Haemagglutination and haemagglutination inhibition tests for rabbit,haemorrhagic disease,2016 -10- 26 发布2017 - 04 - 01 实施,中华人民共和国农业部发布,NY/ T 572-2016,目。吕,本标准按照GB/ T 1. 1-2009 给出的规则起草,本标准代替NY / T 572- 2002 (( 兔出血病血凝和血凝抑制试验方法》。与NY/ T 572-2002 相比,除编辑性修改外，主要技术变化如下:,修改了微量血凝试验中V 型微量滴定板中加人PBS 的孔数(见6 . 1)，修改了V 型微量滴定板,第11 孔的加入样品(见6. 的;,一一修改了玻片血凝法的取样方法和检测方法(见7);,一一参考OIE(( 陆生手册》删除了微量血凝抑制试验检测兔病毒性出血病病毒的方法(2002 年版,2. 3) ;,一一增加了用于检测兔病毒性出血病病毒抗体的微量血凝抑制试验(见8) ,本标准由全国动物卫生标准化技术委员会CSAC/ TC 18 1)归口,本标准起草单位:江苏省农业科学院兽医研究所、中国动物卫生与流行病学中心,本标准主要起草人:王芳、魏后军、宋艳华、范志宇、胡波、魏荣、孙映雪、徐为中,本标准的历次版本发布情况为:,一一- NY/ T 572-2002 ,I,兔病毒性出血病血;疑和血凝抑制试验方法,1 范围,本标准规定了兔病毒性出血病病毒血凝和血凝抑制试验方法的技术要求,本标准适用于兔病毒性出血病病毒,3. 5. 2 所有血,"0"型红细胞与血清,待检,4 仪器设备,4. 1 离心机: 要求最大离心力在12000,4. 2 温箱;(37 士l) OC ,4.3 '恒温水浴锅,4. 4 20C~80C 冰箱,4.5 微量移液器(0. 5μL~1 0 μ L， 2μL~2 0 μL ， 2 0 μL ~200 μ L， 1 00μ L ~l 000 μ L) ,4. 6 微型振荡器,5 微量血凝试验(用于检测兔病毒性出血病病毒抗原),5. 1 在96 孔V 型微量凝集板上，从第2 孔至第10 孔.每孔加入25μL PBS ,NY/ T 572一2016,细胞以20 倍,算红细胞悬液,1 % 悬液，置,1,NY/T 572-2016,5. 2 然后在第1 孔、第2 孔加入1 : 1 0 的待检兔肝悬液2 5 μL ,5. 3 从第2 孔开始，充分?昆合后用25μL 移液器等量倍比稀释至第10 孔，稀释后第1 0 孔弃去25μL ,5. 4 第11 孔~第12 孔加1 : 10 的健康兔肝悬液为阴性对照,5. 5 每孔各加1 %人"0"型红细胞25μL ，立即置于微型振荡器上摇匀，于2 0C ~80C 冰箱静置45 min ,待阴性对照孔中红细胞完全沉积后观察结果,5. 6 每次测定应设已知效价的兔病毒性出血病死亡兔肝悬液阳性对照，方法同5 . 1 ~ 5. 5 ,5. 7 结果判定和红细胞凝集效价表示方法如下:,a) "+ + + +"符号为100 % 凝集， 无红细胞沉积;,b) "+ + +"符号为75 % 以上凝集，有少于25 % 的红细胞沉积;,c) "+ + "符号为50 % ~75 % 凝集，有少于50 % 的红细胞沉积;,d) .，十"符号为凝集的红细胞少于50 % ，沉积的红细胞多于50 % ;,e) "一"符号为100 % 的红细胞沉积,兔病毒性出血病死亡兔肝悬液阳性对照凝集效价与已知效价不得相差一个滴度以上，健康兔肝悬,液阴性对照元凝集;被检样品出现"++"的最高稀释度作为其凝集价，凝集价二三1 : 160 (即第5 孔)的,判为阳性，如在1 : (20~80) 之间，定为可疑，应重复试验，重复后仍为可疑的判为阳性,6 玻片血凝法( 现场快速诊断，用于检测兔病毒性出血病病毒抗原),取少许待检兔肝脏样品，置于清洁的载玻片上，用剪刀将肝脏样品剪碎，滴加2 滴~3 滴1 % 人"0",型红细胞于肝脏样品上，同时设立兔病毒性出血病阴、阳性肝脏对照，轻轻混匀后，于玻片上孵育2 min,若有兔病毒性出血病病毒，肉眼可直接观察到玻片上出现血凝现象,7 微量血凝抑制试验(用于检测兔病毒性出血病病毒抗体),7. 1 在96 孔V 型微量凝集板上，自第1 孔至第11 孔，每孔加入PBS 25μL ，第12 孔加入PBS 50μL ,7. 2 吸取待检血清25μL 于第l 孔，充分混匀后用25μL 移液器等量倍比稀释至第11 孔，稀释后第11,孔弃去25μL,7. 3 第1 孔至第11 孔，每孔分别加4 个血凝单位的抗原25μL ，摇匀， 3 7"C 温箱作用60 min ,7. 4 每孔各加1 %人"0"型红细胞25μL ，立即置于微型振荡器上摇匀，于2 0C ~80C 冰箱静置。mln ,待PBS 对照孔的红细胞完全沉积后观察结果,7. 5 每次测定应设已知效价的兔病毒性出血病阳性血清对照、阴性血清对照，方法同7. 1~7. 40,7. 6 每次测定应设4 个血凝单位的抗原对照(回滴试验) :在微量凝集板第l 孔至第5 孔，每孔加人,PBS 25μL 。第1 孔、第2 孔各加4 个血凝单位的抗原2 5 μL ，从第2 孔起依次做倍比稀释至第4 孔，弃,去25μL o 1 孔~ 4 孔的抗原含量依次为4 、2……
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